Относятся к семейству Micrococcoceae. Род Staphylococcus включает 19 видов, из которых патогенны для человека только некоторые: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Заболевания вызывают золотистые, реже – эпидермальные и еще реже – сапрофитные стафилококки.
Морфология, физиология . Отдельные клетки имеют форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (slaphyle – виноградная гроздь). Размер от 0,5 до 1,5 мкм. В препаратах из патологического материала (из гноя) располагаются поодиночке, парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки имеют способность образовывать нежную капсулу.
Стафилококки – факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях, Гр+. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких – равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10 %) NaCl (ЖСА ). Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят Þ солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины, дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза.
Стафилококки имеют ряд ферментов, расщепляющих многие углеводы, белки. Дифференциально-диагностическое значение имеет тест на сбраживание глюкозы в анаэробных условиях. Из ферментов, участвующих в патогенезе стафилококковых инфекций, только плазмокоагулаза и частично ДНКаза характерны для S.aureus. Другие ферменты (гиалуронидаза, протеиназа, фосфатаза, муромидаза) непостоянны (но чаще продуцируются S.aureus). Стафилококки ситезируют бактериоцины. Устойчивы к пенициллину (пенициллиназа).
Антигены . Вещества клеточной стенки: пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А, типоспецифические агглютиногены, а также капсула, имеющая полисахаридную природу. Пептидогликан имеет общие АГ с пептидогликанами микрококков и стрептококков. Антигенность тейхоевых кислот связана с аминосахарами. Белок А золотистого стафилококка способен к неспецифическому соединению с Fc-фрагментом IgG, в связи с чем он агглютинируется нормальной человеческой сывороткой. У стафилококков есть 30 белковых типоспецифических антигенов. Но внутривидовая дифференциация по Аг структуре в практике не используется.
Патогенность . Повреждающее действие на клетки и ткани организма человека оказывают токсины и ферменты. Также к факторам патогенности можно отнести капсулу, препятствующую фагоцитозу и связывающую комплемент, а также белок А, инактивирующий комплемент и тормозящий опсонизацию при взаимодействии с Fc-фрагментом IgG.
S.aureus способен выделять ряд токсинов, в частности лейкоцидин, который оказывает губительное действие на фагоцитирующие клетки, главным образом на макрофаги. Гемолизины (α, β, дельта, γ) оказывают лизирующее действие на эритроциты человека и животных (кролика, лошади, барана). Основным из них является α-токсин, продуцируемый S.aureus. Помимо гемолитического, этот яд обладает кардиотоксическим действием, вызывает спазм коронарных сосудов и остановку сердца в систоле, он поражает нервные клетки и нейроны, лизирует мембраны и лизосомы клеток, что приводит к освобождению лизосомальных ферментов.
Возникновение пищевых отравлений стафилококковой природы связано с действием энтеротоксинов, продуцируемых золотистыми стафилококками. Известно 6 антигенов различных энтеротоксинов (АВСDЕF).
Эксфолиативные токсины вызывают у новорожденных пузырчатку, локальное буллезное импетиго, генерализованную скарлатиноподобную сыпь. Заболевания сопровождаются внутриэпидермальной отслойкой эпителия кожи, образованием сливающихся пузырей, жидкость в которых стерильна. Фокус стафилококковой инфекции находится чаще всего при этом в пупочной ранке.
Экзоверменты: плазмокоагулаза осуществляет свертывание плазмы (белки как бы одеваются в фиброзный чехол, защищающий их от фагоцитоза). Большие концентрации коагулазы, в организме больного, приводят к уменьшению свертываемости периферической крови, нарушению гемодинамики, прогрессирующему кислородному голоданию тканей.
Гиалуронидаза способствует распространению стафилококков в тканях. Лецитиназа разрушает лецитин, входящий в состав оболочек клеток, вызывает лейкопению. Фибринолизин растворяет фибрин, отграничивающий местный воспалительный очаг, чем способствует генерализации патологического процесса. Патогенетические свойства других экзоферментов стафилококков (ДНКаза, мурамидаза, протеиназа, фосфатаза), часто сопровождающих коагулазную активность, еще не определены.
Экология и распространение . В первые дни жизни человека стафилококки поселяются на слизистых оболочках рта, носа, в кишечнике, а также на коже, входят в состав формирующейся нормальной микрофлоры тела человека.
Стафилококки постоянно поступают в окружающую среду от человека. Они присутствуют на предметах обихода, в воздухе, в воде, в почве, на растениях. Но их болезнетворная активность различна, особое внимание уделяется золотистым стафилококкам как потенциально патогенным для человека. При контакте с источником инфекции носителями S.aureus становятся не все люди. Формированию бактерионосительства способствуют низкое содержание SIgA в носовом секрете и другие проявления функциональной недостаточности иммунной системы. У таких лиц формируется резидентное носительство, т.е. постоянным местом обитания стафилококков становится слизистая оболочка носа, на которой микроорганизмы интенсивно размножаются и выделяются в окружающую среду массивными дозами. В лечебных учреждениях их источником являются больные с открытыми гнойно-воспалительными процессами (инфекция передается контактным путем). Этому способствует длительность выживания стафилококков на окружающих предметах.
Хорошо переносят высушивание, пигмент защищает их от губительного действия солнечного света (прямые солнечные лучи убивают их только через несколько часов). При комнатной температуре они остаются жизнеспособными на предметах ухода за больным в течение 35–50 дней, на предметах твердого инвентаря – десятки дней. При кипячении гибнут мгновенно, чувствительны к дезинфектантам, к бриллиантовой зелени, что позволяет широко применять её для лечения поверхностных воспалительных заболеваний кожи.
Патогенез заболеваний человека . Способны поражать любую ткань человеческого организма. Это местные гнойно-воспалительные процессы (фурункулы, карбункулы, нагноения ран, бронхиты, пневмонии, отит, ангина, конъюнктивит, менингит, эндокардит, энтероколит, пищевые отравления, остеомиелит). Генерадизация любой формы местного процесса завершается сепсисом или септикопиемией. У лиц с иммунодефицитными состояниями стафилококковые инфекции развиваются чаще.
Иммунитет . Взрослые устойчивы, т.к. имеют естественные защитные механизмы и специфические антитела, которые приобретаются в течение жизни при контакте с больными и носителями. В процессе стафилококковой инфекции возникает сенсибилизация организма.
В формировании иммунитета имеют значение как антимикробные, так антитоксические и антиферментные антитела. Степень защиты определяется их титром и местом действия. Большую роль играют секреторные IgA, обеспечивающие местный иммунитет слизистых оболочек. Антитела к тейхоевым кислотам определяются в сыворотках крови взрослых и детей с тяжелыми стафилококковыми инфекциями: эндокардитом, остеомиелитом, сепсисом.
Лабораторная диагностика . Материал (гной) подвергают бактериоскопии и высевают на питательные среды. Кровь, мокроту, фекалии исследуют бактериологическим методом. После выделения чистой культуры по ряду признаков определяют видовую принадлежность. В случае выделения S.aureus определяют плазмокоагулазу, гемолизин, А-протеин.
Серодиагностика: РП (альфа-токсин), РНГА, ИФА.
Для установления источника и путей распространения инфекции, выделенные культуры фаготипируют. Лабораторный анализ непременно включает определение чувствительности выделенной культуры или культур к антибиотикам.
Профилактика и лечение . Профилактика направлена на выявление носителей S.aureus, главным образом среди персонала медицинских учреждений, с целью их санации. Особое внимание уделяется профилактике стафилококковых инфекций у новорожденных.
Для лечения острых стафилококковых заболеваний назначаются антибиотики, выбор которых определяется чувствительностью выделенной культуры к набору препаратов. При септических процессах вводят противостафилококковый иммуноглобулин или антистафилококковую плазму. Для лечения хронических стафилококковых инфекций (хрониосепсис, фурункулез и др.) применяют стафилококковый анатоксин, аутовакцину, которые стимулируют синтез антитоксических и антимикробных антител.
Многие бактериальные инфекции протекают скрыто и имеют стертую клиническую картину , поэтому анализы являются необходимой частью выявления таких заболеваний. С эпидемиологической точки зрения носительство является основополагающим в распространении инфекции, важно своевременно диагностировать его и предупредить заражение. Особенно опасны работники лечебных и детских учреждений, родильных домов, пищеблоков, отделений для новорожденных. Одной из таких бактерий является стафилококк. Рассмотрим в этой статье, как и где сдать анализ на стафилококк и что для этого необходимо.
Основным методом диагностики стафилококка является бактериологический посев отделяемого на культуральные среды, с определением чувствительности микроорганизма к антибиотикам.
Анализ крови на стафилококк проводится методом, выявляющим антитела к антигену бактерии в сыворотке. Применяют реакцию пассивной гемагглютинации и иммуноферментный анализ. Однократные серологические исследования крови на стафилококк не представляют диагностической ценности. Важным является нарастание титра антител при исследовании парных сывороток через 7-10 дней. Выявление антител применяют при гнойно-септических процессах, спровоцированных золотистым стафилококком (сепсис, флегмона, абсцессы, фурункулы, отравления, перитонит, ангина).
Также существует ПЦР на стафилококк в крови, при котором определяют ДНК возбудителя.
Серологические анализы и ПЦР являются дополнением к бактериологическому исследованию.Информация о возбудителе
Стафилококк представляет собой грамположительную бактерию сферической формы
, неподвижную, факультативно-анаэробную, располагающуюся в мазке в виде «гроздьев винограда» и имеющую фермент каталазу. Выделяется до 30 видов этой бактерии. Она может населять слизистые и кожу, не вызывая нарушения, но есть виды, которые чрезвычайно опасны для здоровья и могут вызвать воспалительные заболевания. Выделяют три основных типа патогенных микроорганизмов:
- стафилококк сапрофитный (S.saprophyticus). Чаще наблюдается у женщин, чем у мужчин. Обитает в мочевыводящей и половой системе. Может вызывать уретрит и цистит.
- стафилококк эпидермальный (S.epidermidis). Располагается на коже, может в норме присутствовать в незначительных количествах. При нарушении кожного покрова и снижении иммунитета проникает в кровоток, вызывая патологические процессы, такие как: эндокардит, сепсис, конъюнктивит, инфекцию ран и мочевыводящих путей. Первые два вида длительно считались непатогенными, так как являются коагулазоотрицательными, но потом эту точку зрения опровергли.
- стафилококк золотистый (S.aureus). Является самым патогенным из трех видов. Может вызывать различные заболевания, протекающие в локализованных и генерализованных формах с поражением различных органов и кожи. Вырабатывает пигмент-каротиноид и выделяет энтеротоксины типа А и В.
Передача бактерии происходит различными путями
:
- воздушно-капельный (при разговоре, чихании, кашле);
- контактно-бытовой (руки, белье, предметы ухода, перевязочные материалы);
- пищевой (продукты питания, молоко);
- эндогенный (при иммунодефиците);
- парентеральный (при медицинских манипуляциях).
Посмотрите видео на эту тему
Показания
- подозрение на инфекцию или бактерионосительство.
- регулярный плановый медицинский осмотр медицинского персонала и работников общепита (работники родильных домов обследуются 1 раз в полгода, хирургических отделений 1 раз в квартал).
- обследование перед госпитализацией (для профилактики внутрибольничных инфекций).
- беременность.
- профилактическое обследование.
- неспецифические воспалительные заболевания инфекционной природы.
Также в зоне риска находятся лица с иммунодефицитом (ВИЧ-инфекция), наркоманы, люди, страдающие острыми вирусными заболеваниями (грипп, гепатиты), сахарным диабетом, онкологическими заболеваниями, имеющие ожоги и травмы, проходящие лечение кортикостероидами и цитостатиками, пациенты на гемодиализе.
Как сдать анализ
Для серологического берут венозную кровь из области локтевого сгиба, в пробирку с гелем, содержащим активатор свертывания. Далее в лаборатории ее центрифугируют для отделения сыворотки, которую в дальнейшем исследуют на наличие антител. Кровь сдавать только утром, натощак.
Для полимеразной цепной реакции берут венозную кровь в пробирку с антикоагулянтом, исследуют методом увеличения концентрации нуклеиновой кислоты многократным копированием участка ДНК.
Для бактериологического анализа обычно берут мазок из зева и носа.
Также могут использоваться другие биологические материалы: мокрота, грудное молоко, моча, кал, материал с раневой поверхности, урогенитальный мазок.
Мазок из зева и носа берется с утра, одним стерильным ватным тампоном берут сначала из носа, другим из зева, затем их помещают в пробирки, содержащие транспортный раствор.
Стафилококки хорошо известны как возбудители гнойно-септических инфекций у человека и животных. Наряду с представителями семейства Enterobacteriaceae они занимают ведущее место в этиологии гнойных заболеваний. Род Staphylococcus включает в себя 35 различных видов. В зависимости от способности продуцировать коагулазу, фермент, вызывающий коагуляцию плазмы крови, они подразделяются на две группы: коагулазопозитивные и коагулазонегативные. Место обитания стафилококков – человек и теплокровных животные, внешняя среда. Локализация у человека – кожа и слизистые оболочки, толстый кишечник. Источником стафилококковых инфекций является больной человек или здоровый носитель. Пути передачи: воздушно-капельный, воздушно-пылевой, контактный, пищевой. Восприимчивость к инфекции зависит от общего состояния организма и возраста. Наиболее восприимчивы дети, особенно новорожденные и грудного возраста. В норме способность стафилококка к инвазии и резистентность хозяина хорошо сбалансированы, поэтому инфекция не развивается, пока не создастся ситуация, когда встречаются высоковирулентный микроорганизм или макроорганизм со сниженной резистентностью.
Наиболее известным представителем коагулазопозитивных стафилококков является S.aureus (золотистый стафилококк). Он встречается в передних отделах носовых ходов у 20–40% здоровых взрослых людей. Приблизительно у 1/3 населения он постоянно выделяется из носа, у 1/3 отмечается транзиторное носительство и 1/3 свободна от носительства. S.aureus наиболее часто выделяется при гнойной патологии, вызывает целый ряд заболеваний: фолликулиты, фурункулы и карбункулы, гидроадениты, маститы, раневые инфекции, бактериемии и эндокардиты, менингиты, перикардиты, легочные инфекции, остеомиелиты и артриты, гнойные миозиты, пищевые отравления, синдром токсического шока. Упомянутые заболевания обусловливаются факторами патогенности: капсульными полисахаридами, пептидогликанами и тейхоевыми кислотами, протеином А, ферментами, гемолизинами, токсинами (эксфолиативный, энтеротоксины от А до Е, Н и I), суперантигеном, который принадлежит к энтеротоксину (TSST-1), вызывающему токсический шок синдром.
Все остальные коагулазопозитивные стафилококки выделяются в основном от животных и редко от человека, но в отдельных случаях могут вызывать у человека гнойно-воспалительные заболевания.
Среди коагулазонегативных стафилококков наиболее значимы в патологии человека S.epidermidis и S.saprophyticus . Они могут вызывать инфекции мочевыводящих путей, остеомиелиты, бактериемии, инфекции у новорожденных детей в палатах интенсивной терапии, заболевания глаз, кожные инфекции, поражают клапаны сердца, вызывают гнойные воспаления при операции по замене сердечных клапанов на искусственные, при шунтирование органов, использование внутривенных катетеров, катетеров при гемодиализе, а также при ангиопластике.
В настоящее время микроорганизмы рода Staphylococcus играют лидирующую роль среди возбудителей внутрибольничных инфекций. До определенного времени пенициллин был основным препаратом выбора при лечении тяжелых гнойных инфекций вызываемых S.aureus . Затем стали появляться штаммы устойчивые к этому антибиотику. Оказалось, что устойчивость к пенициллину была обусловлена продукцией фермента.-лактамазы разрушающей β-лактамное кольцо в молекуле пенициллина. В настоящее время около 80% изолируемых штаммов S.aureus синтезируют β-лактамазу. Вместо пенициллина в случае выделения пенициллин резистентных штаммов применяют полусинтетические пенициллины устойчивые к β-лактамазе. Но с 80-х годов начинают выделяться штаммы S.aureus устойчивые и к этой группе антибиотиков в частности к оксациллину и метициллину. Устойчивость таких штаммов связана с продукцией пенициллин связывающего белка (PBP 2а), синтез которого в свою очередь связан с приобретением стафилококками хромосомного гена mecA. Штаммы S.aureus , обладающие этим геном проявляют устойчивость ко всем β-лактамным антибиотикам включая цефалоспорины. S.aureus с упомянутым механизмом устойчивости присваивается термин метициллин- резистентные штаммы. В ряде случаев устойчивость к полусинтетическим пенициллинам может быть обусловлена гиперпродукцией β-лактамаз. В этом случае устойчивость к полусинтетическим пенициллинам при определении ее в лабораторных условиях характеризуется как умеренная. Метициллин-резистентные штаммы S.aureus часто проявляют устойчивость к другим антибиотикам в частности к эритромицину и клиндамицину. В связи с их распространением в ряде зарубежных стран в качестве антибиотиков выбора начинают использовать ванкомицин и тейкопланин. Но уже в 1996 году появляются первые сообщения о выделении штаммов S.aureus с умеренной устойчивостью к ванкомицину (MIC=8 мкг/ мл.), а с 2002 г. штаммов с высокой устойчивостью (МIC>32 мкг/мл.). Метициллин резистентные штаммы выявляются также среди S.epidermidis, а ванкомицрезистентные среди S.haemolyticus .
Для лечения гнойно-септических инфекций, вызванных стафилококками, в настоящее время широко используются лечебные бактериофаги, как монофаги так и комбинированные, содержащие в своем составе расы фагов лизирующих клетки нескольких видов патогенов. В отличие от антибиотиков они не подавляют рост нормальной симбиотической микрофлоры человека и не приводят к дисбактериозам. Тем не менее, нужно имеет в виду, что фаги также вызывают развитие резистентности у стафилококков, поэтому перед их использованием, как и перед применением антибиотиков, необходимо проверять чувствительность к ним у изолируемых штаммах стафилококков.
Показания к обследованию. Признаки гнойно-септической инфекции, обследование медицинского персонала на носительство.
Материал для исследований. Кровь, СМЖ, гной, раневое отделяемое, грудное молоко, мазки из носа; смывы c медицинского оборудования и инвентаря.
Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение возбудителя на питательных средах, выявление его ДНК.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики, показания к применению различных лабораторных исследований. Техника выделения возбудителя в настоящее время хорошо отработана. Микроорганизмы довольно устойчивы к факторам внешней среды, поэтому если отобранный биологический материал невозможно сразу использовать для исследования, можно воспользоваться специальными контейнерами и траспортными средами. Подробнее техника отбора и транспортировки биологического материала в клинико- диагностическую лабораторию описана в разделе преаналитические этапы исследования. Для выделения возбудителя, как правило, достаточно 3–4 дня. Исключением является выделение стафилококков из крови. В этом случае успех техники во многом будет зависеть от правильного выбора времени для отбора крови и присутствия в крови пациентов антибактериальных препаратов.
Выявление специфического фрагмента ДНК S.aureus , S.epidermidis , S.haemolyticus , S.saprophyticus методом ПЦР проводят при исследовании различного биологического материала. Результаты выявления ДНК методом ПЦР имеют качественный и количественный формат. Возможно одновременное выявление и количественное определение ДНК метициллинрезистентного S.aureus и метициллинрезистентных коагулазонегативных стафилококков. Данное исследование отличается простотой и воспроизводимостью, что позволяет оптимизировать эпидемиологический надзор за распространением метициллинрезистентных штаммов, значительно снизив время и трудоемкость исследования. Однако, выявление специфического фрагмента ДНК S.aureus , S.epidermidis , S.haemolyticus , S.saprophyticus методом ПЦР не позволяет выявить жизнеспособные микроорганизмы, а также определить у них чувствительность к антибиотикам.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. При исследовании стерильного биологического материала (кровь, СМЖ) клиническое значение имеет обнаружение S.aureus в любых концентрациях. В нестерильном биологическом материале клиническое значение имеют только высокие концентрации S.aureus , означающие его ведущую роль в воспалительном процессе.
. Методические указания МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».Основные эпидемические штаммы и клоны MRSA
|
Результаты рестрикции представлены в работе (34). Наборы праймеров для идентификации типов SCCmec
5.2.5.3 . Идентификация генов, детерминирующих синтез энтеротоксинов A(sea), В(seb), С(sec) и токсина синдрома токсического шока(tst-Н)Для определения генов sea, seb , sec используется мультиплексная ПЦР. Состав реакционной смеси стандартный. Концентрация праймеров для определения генов sea - 15 пкм/мкл, seb , sec - 30 пкм/мкл. Для определения гена tst - H концентрация MgCl 2 в реакционной смеси - 2,0 мМ, концентрация праймеров - 12 пкм/мкл. Режим амплификации № 1 Наборы праймеров для идентификации генов sea , seb , sec
. Организация эпидемиологического надзора за внутрибольничными инфекциями, вызванными MRSAЭпидемиологический надзор за MRSA является составной частью эпидемиологического надзора за ВБИ и включает следующие составные элементы: Выявление, учет и регистрацию всех случаев ВБИ, вызванных MRSA и подтвержденных результатами микробиологических исследований; Выявление пациентов, колонизованных MRSA (по эпидемическим показаниям); Определение спектра устойчивости изолятов MRSA к антибиотикам, антисептикам, дезинфектантам и чувствительности к бактериофагам; Контроль за состоянием здоровья медицинского персонала (носительством эпидемически значимых штаммов, заболеваемостью); Санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды на наличие MRSA ; Проведение молекулярно-генетического мониторинга, целью которого является получение данных о структуре госпитальных изолятов, выявлении среди них эпидемически значимых, а также расшифровка механизмов их циркуляции и распространения в стационаре; Слежение за соблюдением санитарно-гигиенического и противоэпидемического режима; Эпидемиологический анализ заболеваемости и смертности от ВБИ, позволяющий сделать заключение об источниках, путях и факторах передачи, а также условиях, способствующих инфицированию. Центральным звеном эпидемиологического анализа должен являться молекулярно-генетический мониторинг. Основанный на его данных эпидемиологический анализ не только позволит правильно оценивать, но и прогнозировать эпидемические ситуации, посредством заблаговременных противоэпидемических мероприятий предотвращать вспышки ВБИ, вызванные MRSA . Организационно-методическое руководство работой по профилактике и борьбе с ВБИ, вызванными MRSA , осуществляют структурные подразделения органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в республиках, краях, областях, округах и г.г. Москве и Санкт-Петербурге. Федеральные органы исполнительной власти, включая органы управления здравоохранением, участвуют в осуществлении комплекса мероприятий по профилактике ВБИ, в т.ч. обусловленных MRSA . |
Похожие статьи
